ილიას სახელმწიფო უნივერსიტეტის სამეცნიერო კვლევების ონლაინ პლატფორმა

პროექტები

    არქივი
2019-03-01 - 2021-03-01

რნმ შემცვლელი QPA-ის პრაიმერები გაუმჯობესებული თერმოდინამიკური თვისებებით

კვადრუპლექს პრაიმერული ამპლიფიკაცია (Quadruplex priming amplification (QPA)) წარმოადგენს მეთოდს,
რომელიც დნმ-ის სიგნალის იზოთერული ამპლიფიკაციის და ამ პროცესის რეალურ დროში დაკვირვების
საშუალებას იძლევა. QPA რეაქციის საფუძველს წარმოადგენს დნმ-ის თანმიმდევრობა, GGGTGGGTGGGTGGG (G3T),
რომელიც წარმოქმნის მაღალი თერმული სტაბილურობის სტრუქტურას, კვადრუპლექსს. რეაქციაში პრაიმერად
გამოიყენება G3T თნმიმდევრობა, რომელსაც 3’-პრაიმ ბოლოში ჩამოცილებული აქვს გუანინი. გუანინის ნაკლებობა
კრიტიკულია კვადრუპლექსის ფორმირებისთვის და თანმიმდევრობა ვეღარ წარმოქმნის კვადრუპლექსს.
თავდაპირველად, წაკვეთილი თანმიმდევრობა ებმის პრაიმერის ბმის უბანს. როდესაც პოლიმერაზა პრაიმერს
დაამატებს გუანინს, G3T თანმიმდევრობა თავისთავად ფორმირდება კვადრუპლექსად. რის შედეგადაც პრაიმერი
იზოთერმულად სცილდება სამიზნე დნმ-ს და პრაიმერის ბმის უბანი თავისუფალია შემდეგი პრაიმერისთვის. ასევე,
პრაიმერში ჩაკერებულია ფლუორესცირებადი ნუკლეოტიდი (მაგ. 3-methylisoxanthopterin), რომელიც ხასიათდება
ფლუორესცენციული სიგნალის ძლიერი ზრდით კვადრუპლექსის ფორმირების შემდეგ, რაც სიგნალის თვლის
მარტივ და ეფექტურ საშუალებას წარმოადგენს დამატებითი მთვლელი მოლეკულების გარეშე. კვლევების შედეგად
ჩვენ შევქმენით ორ პრაიმერიანი, ექსპონენციური QPA რეაქცია. რომელიც დნმ-ის ეფექტურ, სწრაფ და იზოთერმულ
ამპლიფიკაციის საშუალებას გვაძლევს. აღნიშნული მეთოდით შესაძლებელია დნმ-ს სიგნალის 1010-ჯერ
გაძლიერება, დაახლოებით 40 წუთში. QPA რეაქცია შესაძლებელია ფართოდ იქნას გამოყენებული ბიოსამედიცინო,
მოლეკულური ბიოლოგიის, გენეტიკისა და სასამართლო ექსპერტიზის, გენეტიკური დაავადებებისა და
პათოგენური მიკროორგანიზმების აღმოსაჩენად. ასევე, სამეცნიერო კვლევების პრაქტიკაში. ახლახანს ვნახეთ, რომ
რნმ-კვადრუპლექსები ხასიათდებიან გაცილებით მაღალი თერმული სტაბილურობით, ვიდრე დნმკვადრუპლექსები. QPA რეაქციაში რნმ შემცველი პრაიმერის გამოყენება რეაქციის ტემპერატურული დიაპაზონის
გაფართოების საშუალებას მოგვცემს. რაც, QPA-ის გამოყენების არეალს გაზრდის.


პროექტები » ყველას ნახვა